LunaGel™ Extracellular Matrix
用于3D細胞和類器官培養(yǎng)的，3D細胞培養(yǎng)儀

可直接使用的光交聯(lián)細胞外基質試劑盒

LunaCrosslinker™
可見光交聯(lián)系統(tǒng)

1. 培養(yǎng)貼壁癌細胞（如腸癌、胃癌、肝癌）需要選擇哪種試劑盒？培養(yǎng)懸浮生長的免疫細胞（如NK細胞、巨噬細胞）應該選擇哪種試劑盒？

答：所有的LunaGel明膠試劑盒都適合培養(yǎng)貼壁癌細胞，是LunaGel豬皮明膠和LunaGel牛骨明膠。對于培養(yǎng)免疫細胞，建議使用LunaGel牛骨明膠，因為其內毒素水平比LunaGel豬皮明膠低很多。

近期會推出一種專門針對免疫細胞的新試劑盒，它使用超純的明膠（沒有內毒素）

2. 細胞樣品需要預處理嗎？如何預處理？

  答：不需要預處理。細胞從組織中提取，通過離心法制備顆粒，然后將細胞顆粒重新懸浮在LunaGel溶液中，并用移液管將溶液送到孔板進行交聯(lián)。

3  一個試劑盒可以合成多少ml凝膠？

  答：每盒10ml。

4.  固化后是否還需要浸入培養(yǎng)基維持生長？基質中是否含有生長因子？如何自己添加生長因子？

  答：光凝膠不含生長因子。如果需要添加，最好在細胞培養(yǎng)液中添加生長因子。

5. 將液態(tài)試劑-細胞混合物加入PDMS容器后再進行固化會影響交聯(lián)過程嗎？交聯(lián)儀器對PDMS有什么影響嗎？

 答：不會。

6. 凝膠中的孔隙有多大？培養(yǎng)基、細胞因子等液體可以流過嗎？還是只能依靠擴散？我們希望液體可以穿過基質的孔隙，基質能否承受住流體剪切力？會被沖碎嗎？細胞能在基質中拉伸和遷移嗎？

  答：孔隙的大小取決于凝膠的硬度，在月交聯(lián)劑中交聯(lián)度越長，毛孔越小，凝膠變得越硬。然而，即使是非常硬的凝膠也會允許基質和細胞因子通過擴散順利的通過凝膠，細胞存活率通常超過90-95%。這種凝膠可以承受流體剪切力而不會破裂，除非凝膠非常軟（交聯(lián)時間小于30秒在LunaCrosslinker中的光照）。凝膠被交聯(lián)到大約1.2kpa的數(shù)（50秒交聯(lián)），在沒有破裂的情況下注入基質。

7.  由于我們希望收集基質中的細胞進行后續(xù)的ELISA或毒性、代謝組學測定，GC-MS等，所以問基質能否被降解？或者細胞能否被取出來用于后續(xù)實驗？基質本身的成分是否會影響這些實驗。

  答：是的，所有光凝膠基質都可以根據(jù)膠原酶制造商的說明書用膠原酶降解。我們會新出一款試劑盒，*優(yōu)化和即用的LunaGel細胞釋放試劑盒，它允許細胞在30分鐘內從凝膠中回收，用于后續(xù)實驗，而不會影響無菌狀態(tài)。可以進行大多數(shù)標準分析：如毒性、代謝活性、免疫熒光、 Qrt-PCR等，不會降解凝膠。在這種情況下，將試劑（如Alamar Blue 等）直接加入凝膠樣品的井中，并以與單層貼壁細胞相同的方式進行測量。如果對細胞內蛋白感興趣，可以釋放細胞/降解凝膠。，凝膠的組成并不是很重要，它們都會在膠原酶的作用下降解，除了透明質酸酶才能降解的LunaGel透明質酸試劑盒。

8.  如果進行免疫熒光拍攝需要在細胞樣品與試劑盒混合前加入染料還是細胞可以在凝膠中被染色？“血管細胞形成毛細血管"3D熒光標記圖怎么拍，是直接將標記好熒光的骨架放到共聚焦顯微鏡下拍攝嗎？

  答：免疫熒光的方法與用于貼壁細胞培養(yǎng)的標準方法非常相似。但是，由于3D樣本中的擴散較慢，因此需要延長孵化步驟。例如，按照我們的方法制作細胞凝膠，在介質中（基質）中培養(yǎng)（7天或者14天），然后固定它們（例如，用4%的多聚甲醛固定1小時），并將他們儲存在4度的緩沖液（PBS）中，直到您準備好染色，對于染色，首*行封閉（5%BSA或者緩沖液中的血清），然后在封閉緩沖液清洗2-3次，每次60分鐘，以清洗游離抗體。洗滌后，用DAP（如果需要）在阻擋緩沖液中加入輔料，孵化過夜。最后再洗2-3次，每次60分鐘，并保存樣品知道成像。

  是的，這張照片是在共聚焦顯微鏡下拍攝。

9.  Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248，這些產品和Gelomics一樣嗎？Corning的產品包裝有5ml和 10ml，而Gel的只有1g，這個1g的凝膠組對應的Corning的產品用量是多少？

答：Corning的356234、356235、356237、356230、356231、354248都是相同材質的（matrigel），只是濃度和體積不同。Martrigel的直接替代品是Gelonomy  LunaGel 可光交聯(lián)性細胞外基質（10ml）低硬度（所有豬、牛、魚都可以使用），與LunaCrossLinker相結合。

GelMA更適合用于再生醫(yī)學/3D打印，它是一種干燥的材（1g），但客戶可以將其溶解在10-20ml的溶液里，具體取決于    使用者情況。如果溶解在10ml的溶液中，GelMA濃度較高（100mg/ml），材料會比濃度較低時（20ml體積，50mg/ml）更硬。

10.  有沒有對應Corning貨號的逐一替代品。

 答：不同的Corning貨號產品其實都是同一產品的變體，只是濃度和體積不同。

12.  Corning的產品已經(jīng)上市30年了，非常老的技術，他們沒有月光凝膠的產品。

13.  目前在中國沒有銷售，但有國際客戶

Terasaki Institute for Biomedical Innovation

寺崎生物創(chuàng)新研究所 洛杉磯

Prof Molly Stevens （Imperial College London）

英國帝國理工學院 Molly Stevens教授

我們最新的競爭對手分析，演出于2022年1月，確定了總    共21個已建立的，和12家初創(chuàng)公司。總部設在美國(60%)，歐洲(25%)和亞太地區(qū)地區(qū)(15%)。到目前為止最大的場份額由以下產品占據(jù)：

天然原產地，如Matrigel，

海藻酸鹽、膠原蛋白等。

天然生物材料是一類

從以下位置提取的材質含有最di限度的組織或植物操縱。Matrigel，一款產品，由康寧公司制造，是一種自然界最hao的例子。生物材料一直是第一個在近30年前引入直到今天，市場仍然存在領xian的產品。一般來說，自然的生物材料提供了一種細胞外微環(huán)境，具有很高的生物活性，因此與細胞交互以指示它們來建造類似人類的組織。

然而，天然材料也承受著批次之間的顯著變化，具有粘性，很難使用，通常會限制用戶調整影響細胞行為的重要參數(shù)，如細胞外基質硬度。其他公司提供*合成的人造細胞外基質材料，如Q-Gel Bio的Q-Gel。它們提供了增強的重復性和可調性，但非常昂貴，并且缺乏天然基質的生物活性。另一方面，GelEconomics使用的是所謂的半合成材料。結合了兩者的優(yōu)點，這些天然衍生材料經(jīng)過內部化學修飾，提供了合成材料的可調性和再現(xiàn)性，同時保留了天然材料的固有生物活性。

以下是我們競爭的三大企業(yè)，它們做得好和不好的是什么

我們的產品與競爭對手的產品相比如何的圖表如下所示。

價值主張與競爭優(yōu)勢

總結為什么我們的產品更好。

世界各地的科學家和研究人員迫切需要更好的實驗室模型系統(tǒng)，以克服與傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)和動物實驗相關的問題。重要的是，這個問題的潛在解決方案不僅必須具有生物學意義，而且還必須易于使用，提供高水平的實驗控制，具有可重復性，并以經(jīng)濟的價格克服進入障礙，成為用戶日常工作流程的一部分。這正是Gelonomy的產品所提供的！

我們的價值主張如下圖所示。

相比以前的產品和與之競爭的產品，LunaGelTM技術具有廣泛的優(yōu)勢。如本文件前面幾節(jié)所述，我們的半合成生物材料和交聯(lián)劑技術的主要優(yōu)勢是：

-LunaGelTM光交聯(lián)技術提供了最gao水平的實驗控制，使研究人員能夠將重要的細胞外基質特性調整到程度。我們是一家提供可以調整以匹配各種人體組織特性的公司，例如大腦、肝臟、乳房、前列腺、皮膚、軟骨等等。

-LunaGelTM材料促進自然細胞-細胞外基質的相互作用，并提供生物學相關性，具有非凡的翻譯價值。

--LunaGelTM是市場上最快的3D細胞培養(yǎng)分析方法。例如，創(chuàng)建3D培養(yǎng)只需不到15分鐘，而市場領xian產品Matrigel(Corning)需要3-4個小時。

-由于交聯(lián)性獨立于天然生物材料形成水凝膠的固有能力(已知不同批次的水凝膠差別很大)，LunaGelTM提供了實驗重復性。

-我們的即用型免優(yōu)化套件和LunaCrosslinker設計極其簡單，因此降低了科學家在沒有3D細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的情況下進入市場的門檻。

-由于LunaGel產品不需要冷卻，而且粘度低于Matrigel等大多數(shù)天然生物材料，因此我們的技術與自動化實驗室系統(tǒng)*兼容，從而實現(xiàn)了3D細胞培養(yǎng)方法的可擴展性。

下面是我們相對于市場領xian產品的競爭優(yōu)勢的高級圖形比較和演示。

LunaCrosslinker™可見光交聯(lián)系統(tǒng)